微量精子制动试验

当检测的样品不是血清，而是宫颈黏液和子宫、卵管分泌液时，由于样品取材量少，难得，采用微量测定法可以弥补以上的不足。而且所得结果与半定量精子制动试验无异，所以作者的实验室即是测定血清中的抗体，亦采用微量精子制动方法。

【准备】

（1）准备微型反应板一块。

（2）将液状石蜡置32℃预温。

（3）精子悬浮液及补体的制备与半定量精子制动试验相同。

（4）子宫、卵管内分泌液经高速离心，除去有形成分，再进行56℃30min灭活处理。

（5）宫颈黏液提取液的制备：于排卵前，从子宫颈管取透明的宫颈黏液，放入尖底塑料小离心管内，称取黏液重量，按宫颈黏液1mg加入灭活未婚女性血清1μl的比例加入血清，充分搅拌后，放置4℃30min，用9700×g，30min离心分离，吸取上清作为宫颈黏液提取液，把宫颈黏液的可溶性成分估计在内，提取液的浓度作为原血清的2倍稀释。再经56℃30min灭活处理后供实验用。

【方法】

（1）取微型反应板，用预温的液状石蜡充满。

（2）用微量移液器，分别把提取液10μl，精子悬浮液（40×106/ml）1μl，补体血清2μl注入由液状石蜡封面的微型反应板孔内。

（3）对照设两组：①补体对照：不加补体或以灭活补体血清代替；②检体对照：用灭活处女血清代替；③用振荡法混合后，置32℃孵育1h、2h、3h；④取出后，用倒置显微镜（200×）计算实验组和对照组的精子运动率（t%，c%）。

【判断】

当c%与t%之比在50%以下时，即精子制动值siv=c/t≥2时，判为阳性。