定量的精子制动化试验

为了观察人体血液中抗精子抗体的动态变化，了解病情的转归及治疗效果，实施抗体的定量测定是非常必要的，但历来所用的抗体定性测定方法，都不能解决这一问题。虽然把原血清作对倍稀释之后做精子凝集试验，也可大致了解抗精子抗体的强弱程度，但精子凝集试验难以把非特异性的精子凝集与抗精子抗体引起的特异性精子凝集相鉴别。而且通常用于凝集试验的被检血清都要先行稀释4～16倍，判断凝集的精子从2条精子的小凝集块到上百条精子以上的大凝集块，强弱差距很大，所以要定量测定抗精子抗体的效价很困难。

半定量精子制动化试验是以被检原血清进行抗精子抗体测定，当抗体效价不很强，被检血清的精子活动率（t）在60%～20%之间时，与对照血清的精子活动率（c）可以进行比较（c/t），若血清抗体效价很强，t的精子活动率在3%～1%之间，c/t比较则失去意义。假如t的活动率变为0，c/t比较值（siv）变成无限大（∞），这时就无法测出抗体量到底有多少。定量的精子制动化试验的特点在于先把被检血清做对倍稀释，按半定量法求出各稀释度的精子活动率（t），随后测定标准阴性对照血清的精子活动率（c），然后按公式c-t/c×100计算出精子制动化率（y）。当抗体效价高时，精子活动率（t）接近于0，而y值接近100，随着血清对倍稀释，t值逐渐接近c值，这时y将接近于0。若把血清稀释倍数作横轴，把各稀释度的y作纵轴，根据y的变化，就可以绘出精子制动化率递减图，将递减曲线与50%y的直线相交点，称为50%精子制动化指数，这个指数的血清稀释倍数，就是我们要寻找的50%精子制动化抗体效价（si），si值不但能准确地表示抗体量，而且重现性很好。由于检测的指标是精子活动率，所以反应时间是关键因素。香山浩二等人研究指出，1～3h之内测定的si值误差性小，随着反应时间延长，si值的误差性变大。因此，要作不同检体的si比较，必须规定在一定时间内进行，如果每次测定有标准阳性血清的si作对比，这对修正被检血清si的误差性极为重要。临床测定以2～3h内判断si值为最好。

【准备】

（1）待检血清：从门诊患者静脉抽血，分离血清，经56℃30min灭活处理，置-20℃冻存备用。

（2）精子悬浮液制备：用手淫法，取健康男子精液，置室温液化，以离心沉淀法（1350×g，5min），除去精浆，用约20倍沉淀精子量的10%灭活未婚妇女血清生理盐水（uws-生理盐水）洗涤沉淀精子2次，然后再用少量10%uws-生理盐水加入沉淀精子块上面，轻轻摇散底部的精子沉淀块，置室温5～10min，收集上层浮游的活动精子，用10%uws-生理盐水调整精子浓度为40×106/ml，供实验用。

（3）补体血清：采用市售或自制的豚鼠血清。

【方法】

（1）待检血清用灭活的未婚女性血清或10%灭活家兔血清作对倍稀释。按精子不动化试验方法，测定各稀释度的精子运动率（t%）。

（2）以标准未婚女性血清为对照，测定其精子运动率（c%）。

（3）根据c-t×100公式算出各血清稀释度精子制动化率（y）。

【判断】

以y作纵轴，血清稀释倍数作横轴，绘出s状弯曲的衰减曲线，这条曲线与50%精子运动率直线相交叉点的血清稀释倍数即为50%精子制动抗体效价（st）。也就是该被检血清所含的抗体量。

根据同一个体不同时期的检测结果可以观察其抗体量的动态变化。或者多个样品同一时间检测结果亦可以比较个体间所含抗体量的不同，这对病态和临床治疗效果的判断是一种非常重要的检查手段。定量精子制动化试验的特点是定量准确、重复性好，即使是轻微变化，亦能作出判断。缺点是操作程序繁多，一次不能作多个样品处理，一般需要先作定性测定，对阳性样品再进行定量检查。为了使检测结果无误，每次检测时，最好用标准阳性血清作对照，以便校正样品所得的结果。